降钙素EEL是治疗骨质疏松的首选药之一,抑制破骨细胞活性,减少破骨细胞数量,抑制骨吸收,降低骨转换,同时有中枢神经镇痛作用,缓解骨痛;用于治疗变形性骨炎、老年性骨质疏松症、骨转移癌所致高血钙症;抑制疼痛介质释放,阻断其受体,增加β-内啡肽释放,起到周围和中枢镇痛效果;抑制肾小管对钙、磷、钠的重吸收,使其在尿中排出量增加;抑制肠道转运钙,抑制胃酸、促胃泌素和胰岛素的分泌
医药
路线1:化学合成法(以醋酸鲑降钙素为例)
- 步骤1:树脂脱保护:用脱保护试剂将RinkAmideMBHA树脂脱保护,去除Fmoc保护基团
- 步骤2:氨基酸耦联:以脱保护后的RinkAmideMBHA树脂为起始原料,以Fmoc保护的氨基酸为单体,依次耦联氨基酸,得到醋酸鲑降钙素肽树脂;其中,耦联第1、2、4~13、15~19、21、23、25和27~32位氨基酸时的缩合剂为N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)/1-羟基苯并三氮唑(HOBt);耦联第3、14、20、22、24和26位氨基酸时的缩合剂为六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基(PyBOP)/HOBt;耦联第2~32位氨基酸之前,用所述脱保护试剂依次脱去上一位耦联产物的Fmoc保护基团
- 步骤3:裂解沉淀:裂解所述醋酸鲑降钙素肽树脂,然后加入乙醚沉淀所述醋酸鲑降钙素肽树脂,得到还原型醋酸鲑降钙素粗肽
- 步骤4:环化纯化:将所述还原型醋酸鲑降钙素粗肽环化得到氧化型醋酸鲑降钙素粗肽;将所述氧化型醋酸鲑降钙素粗肽纯化、转盐、浓缩和冻干得到醋酸鲑降钙素
路线2:动物组织提取法(以猪甲状腺为例)
- 步骤1:脱脂:将猪甲状腺绞碎,加入2~3倍体积的丙酮,充分搅拌下脱脂,离心
- 步骤2:酸提:脱脂后的甲状腺粉中加入4~5倍(体积)0.1mol/L盐酸,加热搅拌1h,再加入1倍(体积)水,混匀,搅拌1h,离心,沉淀用水洗涤,合并上清液和洗液,再搅拌2h后,离心,收集上清液
- 步骤3:沉淀:将1/3~1/2体积的异戊醇-醋酸-水(20∶32∶48,体积比)混合液加入到上清液中,搅匀,加热至50℃,用硅藻土为助滤剂过滤,收集沉淀
- 步骤4:溶解离心:再用0.3mol/L的氯化钠溶解沉淀,用10%盐酸调节pH=2.5,离心除去不溶物,收集离心液
- 步骤5:柱层析纯化:离心液用10倍水稀释后,加入CM-cellulose柱,用稀乙酸溶液洗脱,收集含有降钙素组分的洗脱液,减压浓缩,冻干即得粉末成品降钙素