162635-04-3 西罗莫司脂化物

危险性质：非危险化学品

• 概述 替西罗莫司(temsirolimus)，又名西罗莫司酯化物,其是一种由惠氏医药(现己合并到辉瑞医药)研发用于治疗进展性肾癌的靶向性抗肿瘤药物，也是第一个治疗肾癌的靶向治疗药物，而且是唯一上市的特异性抑制mTOR激酶的药物。
• 相关研究 mTOR激酶是用于调节细胞增殖、生长和细胞存活的重要蛋白质。在体外研究中发现，替西罗莫司抑制mTOR激酶后导致一定的血管生长因子如血管内皮生长因子的水平下降，进而阻止新生血管的发展，结果导致癌细胞死亡。
• 在我国，该药物目前尚未上市，但国外已经完成的各期临床试验结果显示，西罗莫司对晚期肾癌有较好的疗效，具有广阔的应用前景。
• 药理作用 mTOR是一种多功能激酶，属磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol3kinase，PI3K）蛋白激酶类家族，是PI3K／PKB（proteinkinaseB，蛋白激酶B，AKT）信号通路下游的一个效应蛋白，其底物主要控制与细胞生长和增殖密切相关的蛋白质的合成。肾透明细胞癌中普遍存在癌细胞内PI3K-AKT-mTOR信号传导通路的过度激活。
• 制备 1)坦罗莫司半成品的制备 将8.3g坦罗莫司粗品(纯度75.68％，西罗莫司3.47％，异构体16.48％，面积归一化法，下同)用25mL乙酸乙酯溶解后，上样于正相硅球填料柱(南京百赛生物色谱技术有限公司，下同，粒径5μm)，用乙酸乙酯：正庚烷混合溶剂体系进行梯度洗脱，0～10min，乙酸乙酯/正庚烷(v/v，下同)＝60：40，在10～100min，乙酸乙酯/正庚烷从60：40逐渐变化到100：0，系统温度为20℃，收集组分，30℃下减压浓缩至干，得到6.8g坦罗莫司半成品(纯度84.78％，西罗莫司0.02％，异构体13.23％)。 2)高纯度坦罗莫司的制备 将上述6.8g坦罗莫司半成品用21mL乙腈溶解后，上样于反相C18填料柱(日本大曹株式会社，下同，粒径5μm)，用乙腈：1mmol/L的甲酸水溶液(pH3.5)混合溶剂体系进行梯度洗脱，0～10min，乙腈/甲酸水溶液＝50：50，10～100min，乙腈/甲酸水溶液从50：50逐渐变化到80：20，系统温度为20℃，收集组分，30℃减压浓缩至少量，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，分离有机相，干燥，过滤，30℃下减压浓缩至干，得到4.9g高纯度坦罗莫司(纯度99.94％，西罗莫司未检出，异构体0.08％，其他单个杂质均<0.1％)。
• 生物活性 Temsirolimus (CCI-779, NSC 683864)是一种特定的mTOR抑制剂，在无细胞试验中IC50为1.76 μM。Temsirolimus 可诱导自噬和凋亡。
• 靶点 Target Value mTOR (Cell-free assay) 1.76 μM
• 体外研究 Temsirolimus抑制核糖体蛋白S6磷酸化,作用于PTEN阳性DU145细胞比作用于PTEN阴性PC-3细胞更有效,且抑制细胞生长，和细胞的克隆生存，这种作用存在浓度依赖性。 Temsirolimus按100 ng/mL剂量处理原代人淋巴细胞性白血病(ALL) 细胞，显著抑制增殖，且诱导凋亡。在 FKBP12存在时, Temsirolimus 有效抑制mTOR 激酶活性，IC50为1.76 μM, 与Rapamycin（IC50为1.74 μM）类似。Temsirolimus按纳摩尔浓度(10 nM 到<5 μM) 处理，通过FKBP12依赖机制，具有适度的选择性抗增殖活性，在低微摩尔浓度 (5-15 μM)时，可以完全抑制多种肿瘤细胞增殖，涉及FKBP12非依赖性的 mTOR信号阻断。Temsirolimus 按微摩尔而不是纳摩尔浓度 (20 μM)处理，显著降低全部蛋白质合成，也显著降低多聚核糖体的分解, 伴随着翻译延伸因子 eEF2和翻译起始因子eIF2A的磷酸化快速提高。
• 体内研究 Temsirolimus 按20 mg/kg 剂量腹腔注射，每周5天，显著延迟DAOY 移植瘤生长，与对照组相比，处理一周，延迟160%，处理两周，延迟240%。Temsirolimus按 100 mg/kg高剂量单独给药腹腔注射，一周内，诱导肿瘤体积衰退37%。 Temsirolimus 处理2两周，也延迟抗Rapamycin的U251移植瘤生长,延迟148%。Temsirolimus 作用于患Huntington疾病的小鼠模型，抑制mTOR，提高四种不同行为任务的表现，且降低聚合形成。 Temsirolimus处理8226, OPM-2,和 U266移植瘤的皮下生长，诱导显著的抗癌反应，这种作用存在剂量依赖性，作用于8226和 OPM-2移植瘤，ED50分别为20 mg/kg 和2 mg/kg，与抑制增殖和血管生长，诱导凋亡，和肿瘤细胞尺寸降低相关。 每天按10 mg/kg剂量处理携带人ALL的NOD/SCID移植瘤模型，降低外周血膨胀和脾肿大。

医药

路线1：坦罗莫司半成品的制备

• 步骤: 将8.3g坦罗莫司粗品用25mL乙酸乙酯溶解后，上样于正相硅球填料柱，用乙酸乙酯：正庚烷混合溶剂体系梯度洗脱，收集组分，30℃下减压浓缩至干。
• 条件: 0～10min，乙酸乙酯/正庚烷(v/v)=60:40；10～100min，乙酸乙酯/正庚烷从60:40逐渐变化到100:0；系统温度20℃。
• 收率: 得到6.8g坦罗莫司半成品（纯度84.78%）。

路线2：高纯度坦罗莫司的制备

• 步骤: 将6.8g坦罗莫司半成品用21mL乙腈溶解后，上样于反相C18填料柱，用乙腈：1mmol/L甲酸水溶液(pH3.5)混合溶剂体系梯度洗脱，收集组分，30℃减压浓缩至少量，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，分离有机相，干燥，过滤，30℃下减压浓缩至干。
• 条件: 0～10min，乙腈/甲酸水溶液=50:50；10～100min，乙腈/甲酸水溶液从50:50逐渐变化到80:20；系统温度20℃。
• 收率: 得到4.9g高纯度坦罗莫司（纯度99.94%）。