NHS生物素试剂可对溶液中的抗体、蛋白质和任何其他含伯胺的大分子进行简单有效的生物素标记。使用时，对于2mg/mL蛋白质溶液，建议生物素过量20倍；对于10mg/mL蛋白质溶液，建议过量12倍。具体步骤：溶解1-10mg蛋白质于0.5-2.0mL PBS；用DMSO等有机溶剂制备10mM生物素试剂溶液；加入适量试剂到蛋白质溶液；冰浴反应2小时或室温反应30分钟；通过ELISA或Western blot检测标记蛋白。可在pH6.5-8.5范围内偶联至伯胺。
化学合成；生命科学；蛋白质、抗原、抗体、核酸（DNA、RNA）等的标记；蛋白质与肽的生物素酰化
路线1：
- 步骤: 向(+) - 生物素（0.82mmol，200mg）和N-羟基琥珀酰亚胺（0.89mmol，102mg）的溶液中加入3-（乙基亚氨基甲基氨基）-N，N-二甲基丙-1-胺盐酸盐（0.96mmol，184mg）。将反应混合物在室温下搅拌过夜并浓缩，得到白色固体。将粗固体与异丙醇混合，加热至70℃并冷却。将纯产物滤出为白色粉末，收率为91％（0.75mmol，255mg）。
- 条件: 20℃；室温搅拌过夜
- 产率: 91%
- 参考文献: [1] Journal of the American Chemical Society, 2007, vol. 129, # 45, p. 13987 - 13996；[2] New Journal of Chemistry, 2013, vol. 37, # 11, p. 3762 - 3769；[3] Organic Letters, 2013, vol. 15, # 16, p. 4130 - 4133；[4] Journal of Materials Chemistry, 2004, vol. 14, # 17, p. 2638 - 2642；[5] Beilstein Journal of Organic Chemistry, 2015, vol. 11, p. 784 - 791
路线2：
- 步骤: 向带有搅拌棒的圆底烧瓶中加入生物素（2.0g，8.2mmol）和DMF（60mL）。将固体加热溶解后，加入N-羟基琥珀酰亚胺（0.944g，8.2mmol）和DCC（2.2g，10.7mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤白色固体，减压蒸发DMF。通过从异丙醇中重结晶进一步纯化所得残余物，得到所需产物2（2.7g，M + H + = 342.5），为白色晶体。
- 条件: 20℃；加热溶解；室温搅拌过夜；减压蒸发；异丙醇重结晶
- 产率: 2.7g
- 参考文献: [1] Patent: WO2015/6754, 2015, A2. Location in patent: Paragraph 00274
