生命科学;定量分析血清中甘油三酯;前列腺素脂的分析;脂肪分析;食品工业中用于油脂加工、干酪制造、面团改良、增香、水解油脂;饲料工业中作为复合酶添加剂;医药和精细化工中用于手性化合物合成;生物柴油制造中催化酯交换;造纸工业中去除木浆松脂;皮革加工和纺织工业中应用;酶制剂用于脂类改性、水解,防止油脂酸败,增强面团稳定和耐发酵力,改善馒头品质等。
食品工业; 医药; 日化; 饲料工业; 精细化工; 生物柴油; 造纸工业; 皮革加工; 纺织工业
路线1:微生物发酵法
- 步骤: S1:将产脂肪酶的假单胞菌ATCC21808的单一菌落置于装有25mL摇瓶培养液的250mL摇瓶中,在28℃、200rpm条件下培养20h,然后按10%的接种量转入发酵培养液中,在28℃、200rpm条件下培养68h,得到发酵液;其中,每升摇瓶培养液中包括:酵母提取物5g、蛋白胨5g、植物油10g,余量为水;pH值为7.0;每升发酵培养液中包括:酵母提取物10g、蛋白胨5g、NaCl0.5g、植物油10g,余量为水;pH值为7.0;S2:将发酵液离心,收集上清液,得到脂肪酶粗酶液;其中,离心是采用高速冷冻离心机,在4℃、10800g条件下离心15min;S3:将脂肪酶粗酶液上固定化马抗体柱,上柱期间,检测流出液的脂肪酶活性,直到有脂肪酶活性流出,停止上液;之后用pH值为7.2的0.1M的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液洗柱,再采用pH值为3的0.1M磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液洗脱,收集洗脱液,得到纯化后的脂肪酶;并且待酶流出后,立即用pH值为8的1M的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液洗柱至中性,也用该溶液调洗脱液至pH值至7;其中,固定化马抗体柱的制备方法包括步骤:选4匹蒙古马(重量和对应的年龄分别为:重量为240公斤且年龄为3岁、重量为290公斤且年龄为5岁、重量为320公斤且年龄为7岁、重量为360公斤且年龄为10岁),每两周免疫一次,共进行12周的免疫,每次2mL,剂量分别为15mg脂肪酶加等量的弗氏完全佐剂,多点皮下免疫,ELISA检测抗体滴度大于1:10000后收集抗血清;将抗血清离心除去细胞成分和其他沉淀物,收集上清液后采用proteinA或proteinG亲和层析柱纯化出多克隆抗体;将多克隆抗体与活化的Sepharose2B连接,得到固定化马抗体柱;S4:在纯化后的脂肪酶中加入聚乙二醇,使脂肪酶沉淀;之后离心,收集沉淀;将沉淀透析后冻干干燥,得到脂肪酶,酶活经测定达15-25万单位/克;其中,离心是在4℃、000g条件下离心8min。
路线2:动物组织提取法
- 步骤: 1.以猪胰为原料制取。取3kg猪胰脏绞碎后经三氯甲烷和丁醇二次脱酯,再经乙醇抽提,然后冷冻干燥制得365g胰脂酶。
- 由动物组织制备:小牛、小山羊或羊羔的第一胃可食组织,或动物的胰腺组织。由上述两种可食组织净化后用水抽提而得。
- 从植物中提取或由米曲霉制得。