作为分析试剂(测定氨基转换酶和脱氢酶的底物,测定肝功能的配套试剂);用于化学合成;作为医药、保健品原料及食品添加剂;可用于色氨酸分析;作为有机合成中间体;可作为运动营养饮料成分及体格增强补剂。
医药原料; 保健品原料; 食品添加剂; 分析试剂; 有机合成中间体; 运动营养饮料成分; 体格增强补剂
路线1:化学合成法
- 步骤1:将225g草酰琥珀酸三乙酯与600ml浓盐酸混合,放置过夜;蒸馏浓缩至140℃,剩余物冷却结晶,得α-酮基戊二酸110-112g,收率92-93%。
路线2:多步化学合成法
- 步骤1(草酰丁二酸三乙酯制备):无水乙醇360mL中分批加入金属钠23g(1.0mol),加热回流至反应完全;蒸出乙醇并滴加甲苯除净,冷至室温后加入无水乙醚650mL、草酸二乙酯146g(1mol)、丁二酸二乙酯174g(1.0mol),室温放置12h;加水500mL,分出有机层,水层用乙醚提取3次,合并有机层经无水硫酸镁干燥,回收乙醚得黄色油状化合物(草酰丁二酸三乙酯)235-250g,收率86-91%。
- 步骤2(α-酮戊二酸制备):将草酰丁二酸三乙酯225g(0.82mol)与浓盐酸330mL、水660mL混合,加热回流4h;减压浓缩至干(60-70℃),剩余物加硝基乙烷200mL加热溶解,趁热过滤,滤饼用热硝基乙烷洗涤;合并滤液,0-10℃搅拌5h,抽滤后90℃减压干燥4h,得α-酮戊二酸88-99g,收率73-83%。
生物转化法
- 步骤1(菌种活化):马克斯克鲁维酵母ATCC36534接种于含葡萄糖10-20g/L、蛋白胨5-10g/L、酵母浸出粉3-5g/L、琼脂15-20g/L的斜面培养基,25-30℃培养24-36h。
- 步骤2(种子培养):挑取活化菌体接种至无琼脂的种子培养基(同斜面培养基成分),25-30℃、200-250r/min振荡培养20-24h,得干菌体5-7g/L种子液。
- 步骤3(转化培养):种子液按5-10%体积接入含蔗糖50-100g/L、酵母浸出粉10-20g/L、KH₂PO₄ 3-5g/L、K₂HPO₄ 5-6.5g/L、MgSO₄ 0.5-1.0g/L的转化培养基,25-30℃、200-250r/min振荡培养20-24h,加入终浓度10-50mmol/L H₂O₂或0.5-1.0μmol/L甲氨蝶呤及20-50g/L L-谷氨酸,得α-酮戊二酸浓度17.3-42.9g/L。
- 步骤4(分离纯化):离心(3000-4000g,5-10min)除菌体,上清液加5-10g/L活性炭搅拌30-60min,过滤后减压浓缩至原体积1/2-1/4,离心除沉淀;加晶种(10-20g/L),4℃静置8-12h,抽滤得晶体,45℃真空干燥得α-酮戊二酸。