用亲和色谱法精制胰蛋白酶;血纤维蛋白/血纤维蛋白原无降解鉴定试验;作为抗营养因子保护大豆籽粒自身不分解代谢;用于抑制胰蛋白酶,间接抑制糜蛋白酶、弹性蛋白酶、羧基肽酶;在过敏反应、静脉注射不良反应等研究中作为对照或工具药
医药
路线1:牛肺为原料提取法
- 步骤1(提取):新鲜或冰冻牛肺绞碎后,用5倍量水搅匀,2.5mol/L硫酸调节pH至2,搅拌提取8h,过滤;滤渣同法再提取1次,合并提取液。
- 步骤2(盐析去杂蛋白):每升提取液加硫酸铵277g,用5mol/L硫酸调pH至1.5,放置过夜;除去上清液,过滤后滤液用5mol/L氢氧化钠调pH至5.5,每升加硫酸铵255g,搅匀静置48h,过滤得盐析物。
- 步骤3(盐析、溶解、沉淀):盐析物用9倍量水溶解,搅拌2h后冰箱过夜,过滤;滤液加1/20量50%三氯乙酸,速加热至80℃后冷却至30℃以下,过滤。滤液用5mol/L氢氧化钠调pH至3,每升加硫酸铵610g,搅拌溶解后静置过夜,取沉淀物。
- 步骤4(透析、脱盐、沉淀):沉淀物用4倍量水溶解,10℃以下流动自来水透析24h,加硅藻土过滤;滤液用强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7与强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×7(比例3:1)搅拌吸附20min至无硫酸根离子,滤过得脱盐液(pH7左右)。
- 步骤5(去热原、沉淀、干燥):脱盐液加0.9%氯化钠和1.5倍量丙酮析出沉淀,过滤;滤液再加4倍量丙酮析出沉淀,过夜后用丙酮、乙醚洗涤,干燥。
- 步骤6(最终纯化):沉淀物用60倍量80%甲醇溶液溶解,冰浴搅拌2h后过滤;按滤液体积1%加30%氯化钠溶液和5倍量丙酮,沉淀过夜后离心,丙酮洗涤干燥得沉淀物。再用60倍量无热原水溶解,5mol/L氢氧化钠调pH至11,冰箱放置4d后过滤;滤液用冰醋酸调pH至4-5,加1%量300g/L氯化钠溶液和5倍量丙酮,析出沉淀,过夜后丙酮、乙醚洗涤干燥得成品。
路线2:人尿为原料提取法
- 步骤1(原料处理、酸化):新鲜男性尿100L(0-4℃操作)经双层纱布过滤,用1mol/L NaOH调pH至8.5,静置2h弃沉淀得上清液;搅拌下滴加1mol/L HCl调pH至4.0,离心20min除沉淀得酸化尿液。
- 步骤2(吸附、洗脱):取Polyerde IV 500g加入酸化尿液,搅拌吸附2h后过滤;吸附剂用常水洗涤至白色,再用2mol/L NH4HCO3液4L洗脱,收集洗脱液。
- 步骤3(盐析、透析、浓缩、干燥):洗脱液加固体(NH4)2SO4至80%饱和度,4℃静置4-5h,离心30min收集沉淀;沉淀溶于适量蒸馏水,加磷酸盐缓冲液透析至盐除尽得透析液;浓缩后冷冻干燥得UTI成品。